Отдаленные последствия перенесенных дифтерийных миокардитов (ранних и поздних)

Минеральные компоненты

нативный 24,3 28,6 7,2 6,2
после дезацилювання 3,5 3,9  —  —
Примечания: 1. Концентрация этанола 1%, в среду 5 дополнительно вносили 0,1% ацетата калия при получении инокулята и биосинтезе ЭПС.

  1. „ — »- Не определяли.
  2. Дезацильований ЭПС получено в результате щелочной обработки нативного препарата.
  3. Результаты достоверны при р <0,05.
Соотношение глюкозы, маннозы, галактозы и рамнозы в составе всех ЭПС было одинаковым и составило 3: 2: 1: 1. Исследование молекулярной массы этаполана, синтезированного при различных условиях культивирования, показало, что средняя молекулярная масса полисахаридов, полученных на средах 3 и 5, практически не менялась в процессе выделения и очистки и составила 1500000 (табл. 7). Это можно объяснить тем, что полученные полисахариды является высокоацилированный, а в результате ацилирования углеводного цепи формируется прочная структура ЭПС, которая остается без изменений в процессе обработки растворов этаполана органическими растворителями.
купить инструменты

Таблица 7 Молекулярная масса этаполана, синтезированного при различных условиях культивирования

Среда

Выпаренный концентрат ЭПС ЭПС после осаждения и высушивания
средняя молекулярная масса, млн фракции с молекулярной массой до 2 млн,% средняя молекулярная масса, млн фракции с молекулярной массой до 2 млн,%
1 1,44 31,72,19 0,48 82,74,89
2 1,44 29,91,92 0,50 71,23,56
3 1,61 23,71,59 1,54 25 , 71,80
5 1,57 25,41,27 1,48 27,81,39
Примечание: Концентрация этанола 1%, в среду 5 дополнительно вносили 0,1% ацетата калия при получении инокулята и биосинтезе ЭПС. Исследование реологических свойств ЭПС показало, что растворы этаполана, синтезированного на среде 5 из 20 мМ К +, на всех этапах его выделения и очистки характеризовались высокой вязкостью в присутствии 0,1 М КСl и в системе Cu2 + — глицин (1200 и 1500—2000% соответственно) по сравнению с ЭПС, синтезированными на среде с 100 мМ К + (1000 и 800-1000% соответственно). Таким образом, на основе исследований особенностей энергетического и конструктивного метаболизма у штамма Acinetobacter sp . В-7005 и В-7005 (1 нг) определены пути регуляции С2-метаболизма, что позволило разработать новый способ получения этаполана на незабуференому среде минимального состава. Этаполан, синтезированный в таких условиях, характеризовался необходимыми для практического использования реологическими свойствами. ВЫВОДЫ

  1. Определены особенности энергетического и конструктивного метаболизма С2-субстратов в Acinetobacter sp. В-7005 и В-7005 (1 нг), обнаружены сайты метаболического лимитирования и разработаны подходы к их устранению.
  2. Установлено, что окисление этанола и ацетальдегида осуществляется НАД + и НАДФ + зависимыми дегидрогеназы, ацетат привлекается к метаболизму с участием ацетил-КоА-синтетазы. Анаплеротичною последовательностью реакций, пополняет пул С4-дикарбоновых кислот в клетках Acinetobacter sp . В-7005 и В-7005 (1 нг), является глиоксилатный цикл, а цикл трикарбоновых кислот выполняет преимущественно биосинтетическую роль. Синтез фосфоэнолпируват обеспечивается двумя ключевыми ферментами глюконеогенеза — ФЭП-карбоксикиназою и ФЭП-синтетазой.
  3. Впервые показано, что „ узким "местом метаболизма этанола в Acinetobacter sp. В-7005 и В-7005 (1 нг) является ассимиляция ацетата (реакция, катализируемой ацетил-КоА синтетазой, является скорость-лимитувальною).
  4. Установлено, что ингибиторами ацетил-КоА-синтетазы является катионы натрия и интермедиатов окисления этанола и ацетальдегида (НАДН и НАДФН), а активаторами — катионы калия и магния. Показана возможность повышения активности ацетил-КоА-синтетазы при внесении в среду с этанолом экзогенного ацетата.
  5. На основе исследования регуляции С2-метаболизма разработан способ получения этаполана, ключевыми элементами которого являются: отсутствие в среде культивирования катионов натрия, повышение в нем концентрации пантотената кальция в 0,0009%, а также наличие 0 , 1% ацетата калия при получении инокулята и биосинтезе полисахарида. Это позволило осуществить без снижения показателей синтеза процесс получения этаполана на незабуференому среде, в которой содержание солей снижена в 4 раза (с 11 до 2,95 г / л).
  6. Впервые показано, что при условии устранения лимитирование С2-метаболизма, молекулярная масса этаполана составляла 1500000 и не снижалась в процессе его выделения и очистки, а содержание жирных кислот в ацильованому полисахаридов достигал 15% .
  7. Повышенное содержание жирных кислот в составе этаполана и молекулярная масса обуславливают улучшение реологических свойств, определяющих практическую ценность этого полисахарида.
Список РАБОТ, опубликованных по теме диссертации 1. Пирог Т. П., Соколов И. Г., Кузьминская Ю. В. *, Малашенко Ю. Р. Некоторые особенности метаболизма этанола в мутантного штамма Acinetobacter sp., Не образующего экзополисахариды // Микробиология. 2002, 71, № 2. С 222-229. (Соискателем лично исследовано активность ключевых ферментов метаболизма этанола и подобраны условия для определения активности ацетил-КоА-синтетазы). 2. Пирог Т. П., Кузьминская Ю. В. * Регуляция метаболизма ацетата в штамма Acinetobacter sp., Растущего на этаноле // Прикладная биохимия и микробиология. — 2003. — 39, № 2. — С. 180-188. (Соискателем выявлено «узкое место» метаболизма ацетата: реакция, катализируемая ацетил-КоА-синтетазой является скорость-лимитувальною; обнаружены ингибиторы и активаторы этого фермента). 3. Пирог Т. П., Кузьминская Ю. В. * Особенности центрального метаболизма штамма Acinetobacter sp растущего на этаноле // Микробиология. — 2003. — 72, № 4. — С. 459-465. (Соискателем лично определены активность ферментов цикла Кребса и ключевых ферментов глиоксилатный цикла и глюконеогенеза, а также исследована скорость дыхания интактных клеток Acinetobacter sp. В присутствии органических кислот цикла Кребса).