Апоптоз, иммунофенотип

А. Б.
Рис. 2. Изменения экспрессии CD13 (А) и коекспресии CD13 / HLA-DR (Б) антигенов на гранулоцитах ПК лиц, больных МДС в зависимости от дозы облучения. Пролиферация бластных клеток является прогностическим фактором трансформации МДС в острую лейкемию. Учитывая это, нами проведена сравнительная иммунофенотипических характеристика популяций клеток миелоидного происхождения и бластных клеток в ПК и КМ больных МДС. В исследованной фракции гранулоцитарных клеток среди больных РАИБ, РАИБ-Т процент CD34 + клеток был достоверно повышен, что дает нам возможность предположить наличие клеток с разной степенью дифференцировки. Установлено снижение уровня CD38 + клеток, что является характерным признаком ограниченной дифференциальной способности. С ростом экспрессии CD34 антигена коррелирует значительное увеличение количества CD117 + клеток, р <0,01. При всех вариантах МДС значительно повышен уровень HLA-DR в КМ по сравнению с ПК, что не свойственно для данной популяции в норме. Наблюдается рост CD71 + клеток на мембране КМ больных МДС. По мнению некоторых исследователей этот антиген является дискриминирующих маркером бластных клеток. Рост функциональной активности ранних клеток миелоидного ряда обнаружено из-за повышения показателей ИФ некоторых антигенных детерминант.
здесь
По этому показателю нами отмечено однонаправленные изменения в КМ при всех вариантах МДС антигенов CD117, CD33, CD34, CD71, по сравнению с ПК. Только уровень средних показателей ИФ для популяции CD38 + клеток отличает исследованы подгруппы. При РА, МДС-Н этот показатель в сети не отличается от среднегрупповых значений в ПК, зато среди больных РАИБ, РАИБ-Т уровень ИФ CD38 антигена достоверно возрастает, р <0,01. Популяция бластов КМ больных МДС представлена CD34 +, CD71 +, CD117 +, CD117 + 34 + клетками (табл.1). Таблица 1 Сравнительная характеристика экспрессии антигенов гемопоэтических клеток периферической крови и костного мозга больных МДС

Показатели, (%) I подгруппа РА / МДС-Н (n = 31) MSD I и подгруппа РАИБ / РАИБ-Т (n = 24) MSD
ПК КМ ПК КМ
CD34 + 0,40,30 1,10,13 * 1,10,29 68,07,08 *
CD71 + 12,22,06 24,43,06 * 5,62,44 23,03,61 *
CD117 + 0,80,21 5,20,12 * 1,80,51 11,83,01 *
CD117 + 34 + 0,40 , 04 1,30,04 * 1,00,02 65,011,20 *
Примечание. * — вероятность расхождений показателей ПК и КМ р <0,01. Имунофенотипична картина КМ при РАИБ, РАИБ-Т прежде характеризовалась высоким уровнем экспрессии CD34 антигена — 68,07,08 (MSD). Зато отсутствует корреляция между количеством бластов и CD34 + клеток, что позволяет предположить наличие аномальной персистенции экспрессии этого антигена на клетках, созревают. Наряду с этим для бластных клеток характерна коекспресия CD117 и CD34 антигенов. Наличие CD71 антигена свидетельствует о нарушениях в эритроидного ростка кроветворения. Высокий уровень экспрессии CD71, CD117 и коекспресии CD117, CD34 антигенов, по нашему мнению, может иметь диагностическое значение. Поскольку при имунофенотипичному анализе КМ в исследованных подгруппах определялись бластные клетки, которые представили похожий набор антигенных детерминант по сравнению с популяцией гипогранулярних нейтрофилов, нами предложено предположение о миелоидной происхождения бластов. Несоответствие высокой пролиферативной активности клеток гемопоэза цитопеничному синдрома при МДС многими исследователями связывается с активацией запрограммированной клеточной гибели. Первым этапом в направлении исследования этого феномена было изучение особенностей экспрессии CD95 антигена, так как ему принадлежит важная роль в реализации Fas-опосредованного апоптоза. Экспрессию антигена CD95 изучали на клетках лимфоцитарного, гранулоцитарного рядов и бластных клетках при МДС. В ПК уровень экспрессии CD95 на лимфоцитах значительно повышен по сравнению с контрольной группой при всех вариантах МДС. Большой интерес представляют апоптозных потенции нейтрофилов и их миелоидных предшественников при МДС. В нашем исследовании гранулоцитарный популяция ПК больных МДС имеет пониженный уровень Fas-рецептора. Нарушение «апоптозной поведения» нейтрофилов могут возникать за счет дефектов апоптозной программы, наследуется от костномозговых предшественников, или за счет нарушений в системе факторов, которые контролируют апоптоз. При МДС в подгруппе РА, МДС-Н установлена взаимосвязь между уровнем Fas-рецептора и Bcl-2 в популяции гранулоцитов ПК. Линия регрессии отражает корреляционные связи между данными показателями с высокой степенью вероятности (r = -0,84; р <0,005). В подгруппе больных РАИБ, РАИБ-Т установлено негативные корреляционные связи между этими показателями, как для лимфоцитарной (r = -0,72; р <0,03), так и для гранулоцитарный (r = -0,90; р <0,001) популяций ПК. Выявленные особенности демонстрируют значительный рост числа Bcl-2 положительных клеток в сочетании со снижением выраженности апоптоза в гранулоцитах больных МДС, что может быть связано с негативным прогнозом, первичной резистентностью к химиотерапии и соответственно сокращением продолжительности жизни. Проведена сравнительная характеристика уровней экспрессии CD95 и Bcl-2 на ПК и КМ больных МДС. Картина, которая наблюдалась в КМ в обследованных подгруппах, имела противоположный характер, чем в ПК. Разнонаправленность процессов в ПК и КМ нашла отражение как в снижении процентного содержания Bcl-2, так и росте экспрессии CD95-рецептора. В подгруппе больных РАИБ, РАИБ-Т повышение уровня экспрессии CD95 на ГК КМ коррелирует с уровнем экспрессии CD34-рецептора. Учитывая важную роль Fas-рецептора в реализации запрограммированной клеточной гибели, такая связь может стать отражением аномальной программы гемопоэза при миелодисплазия. Следующий этап в направлении изучения особой роли апоптоза в патогенезе МДС связан со специфическими структурно-молекулярными перестройками, которые характерны для клетки в состоянии запрограммированной клеточной гибели. Проведенное нами исследование было построено на определении сформированных молекул фосфатидилсерина путем взаимодействия с анексином-V. Количество анексин-V + PI — клеток гранулоцитарного ряда ПК повышена за счет клеток на поздних стадиях апоптоза. Процент анексин-V + PI — и анексин-V + PI + среди клеток лимфоидного ряда КМ был выше, чем в ПК при всех подтипах МДС. Уровень апоптотических клеток в гранулоцитарный популяции КМ также рос, однако в подгруппе, которая объединяет больных РАИБ, РАИБ-Т этот показатель был снижен по сравнению с подгруппой больных РА, МДС-Н. Пониженный уровень апоптоза может объяснить более высокую степень трансформации в ГЛ. Наивысшая степень апоптоза в нашем исследовании был зафиксирован в бластных клетках КМ, что подтверждается высокими среднегрупповой значениями индекса апоптоза, который был подсчитан в соответствии с рекомендациями Qi-Zhen Cao et al., 2005. Низкий апоптотических индекс установлен для подгруппы больных РАИБ, РАИБ-Т вероятно связан с негативным прогнозом данных вариантов МДС.